Метод основан на способности витамина К в щелочной среде образовывать с диэтилмалоновым эфиром окрашенные соединения, интенсивность окраски которых определяют колориметрически.
Ход анализа. Точную навеску растительного сырья (10–15 г) тщательно растереть с кварцевым песком и небольшим количеством карбоната натрия. В ступку налить 10 мл диэтилового эфира и продолжить растирание. Полученный гомогенат количественно перенести на воронку Шотта. Для этого ступку трижды ополоснуть диэтиловым эфиром порциями по 5 мл, а смывы отфильтровать на том же фильтре. Осадок на фильтре трижды небольшими порциями промыть тем же растворителем, фильтраты собрать в плоскодонную колбу и высушить над свежепрокаленным сульфатом натрия.
Осушитель отфильтровать через воронку Шотта и промыть диэтиловым эфиром на фильтре. Фильтрат собрать в круглодонную колбу со шлифом. Растворитель отогнать на ротационном вакуумном испарителе досуха в атмосфере инертного газа при температуре 40 0С. Полученный остаток растворить в 5 мл хлороформа, прилить 1 мл 1%-го спиртового раствора диэтилмалонового эфира, 0,2 мл 1%-го раствора гидроксида калия и довести объем раствора до 10 мл дистиллированной водой.
Параллельно приготовить контрольный раствор. Для этого в градуированную пробирку вместимостью 10 мл прилить 5 мл стандартного раствора витамина К (0,04 мкг/мл), добавить 1 мл 1%-го спиртового раствора диэтилмалонового эфира, 0,2 мл 1%-го раствора гидроксида калия и довести объем до метки дистиллированной водой.
Измерить интенсивность анализируемого и контрольного окрашенных растворов на фотоколориметре при длине волны 470 нм в кювету с длиной оптического пути 10 мм относительно растворителя. По величине экстинкции анализируемого и контрольного растворов рассчитать массовую долю витамина К (СК, мкг %) по формуле:
где А – оптическая плотность анализируемого раствора;
А1 – оптическая плотность контрольного раствора;
m – масса навески анализируемого продукта, г;
0,2 – содержание витамина К в контрольном растворе, мкг.
Определение витамина К в растительном сырье
В основе спектрофотометрического метода определения витамина К в растительном сырье лежит цветная реакция с 2,6-дихлорфенол-индофенолятом натрия в щелочной среде.
Ход анализа. Навеску растительного сырья (15–20 г) поместить в плоскодонную колбу вместимость 250 мл и залить 100 мл ацетона. Экстракцию вести при температуре 5–10 0С при постоянном перемешивании в течение 10–12 часов. Полученный экстракт отфильтровать на воронке Шотта круглодонную колбу со шлифом. Отогнать растворитель на ротационном вакуумном испарителе в атмосфере инертного газа досуха, остаток растворить в 100 мл этилового спирта. Отобрать 5 мл (пипеткой) полученного раствора в мерную колбу вместимостью 25 мл и довести объем до метки тем же растворителем. Для колориметрирования в градуированную пробирку отмерить 2 мл разбавленного раствора, добавить 1 мл 1%-го спиртового раствора гидроксида натрия, 0,3 мл 0,001 н 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия и довести объем до 10 мл этиловым спиртом. Оптическую плотность анализируемого раствора измерить ровно через 10 минут при длине волны 670 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
Параллельно определить оптическую плотность стандартного образца менадиона, приготовленного аналогичным образом. Массовую долю витамина К (СК, мг%) вычислить по формуле:
где А – оптическая плотность анализируемого раствора;
АС – оптическая плотность стандартного раствора менадиона;
СС – содержание витамина К в стандартном образце менадиона, мг/мл;
V – объем спиртового раствора экстракта, 100 мл;
V1 – объем спиртового раствора экстракта, взятого для разбавления, 5 мл;
V2 – объем спиртового раствора экстракта после разбавления, 25 мл;
m – масса анализируемого продукта, г;
W – потеря в массе при высушивании сырья, %;
100 – коэффициент пересчета в проценты.
|
Необходимые реактивы, посуда, оборудование: §диэтиловый эфир, хлороформ, ацетон, этиловый спирт, свежепрокаленный сульфат натрия, карбонат натрия безводный, 1%-ный спиртовой раствор диэтилмалонового эфира, 1%-ный раствор гидроксида натрия, стандартный раствор витамина К (менадион), кварцевый песок; 1%-ный спиртовой раствор гидроксида натрия, 0,001 н раствор 2, 6-дихлор-фенолиндофенолята натрия; §фарфоровые ступки с пестиком, плоскодонные колбы, колбы с пришлифованными пробками вместимостью 100 мл, воронки Шотта, мерные колбы вместимостью 10, 25 мл, градуированные пробирки, пипетки; §фотоэлектроколориметр (кюветы с длиной оптического пути 10 мм), спектрофотометр, аналитические весы, ротационный вакуумный испаритель, водяная баня. |
Рабочий раствор витамина К (4 мкг/мл). Точную навеску 0,04 г 100%-го препарата витамина К растворить 20 мл хлороформа, количественно перенести в мерную колбу вместимостью 100 мл и довести объем раствора до метки тем же растворителем. Из полученного раствора отобрать 1 мл и перенести в мерную колбу вместимостью 100 мл, довести объем раствора до метки тем же растворителем.
Стандартный раствор витамина К (0,04 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 100 мл внести 1 мл рабочего раствора витамина К (4 мкг/мл), растворить 20 мл хлороформа и довести объем раствора до метки тем же растворителем.