Выделение холестерола из мозга
Холестерол в мозговой ткани содержится почти исключительно в свободном виде, а не в виде эфиров.
Ход анализа. Навеску мозга в 3–5 г растереть в фарфоровой ступке с 6–10 г гипса до гомогенного состояния. Полученную кашицу распределить в виде тонкого слоя стеклянной палочкой на предметном стекле и подсушить в сушильном шкафу при температуре 60 оС. Подсушенный с гипсом мозг соскоблить скальпелем со стекла и измельчить в ступке. Навеску полученного сухого порошка (0,1 г) перенести в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавить 15 мл спиртово-эфирной смеси (3:1). Колбу со смесью выдержать в водяной бане при температуре 50 оС в течение 30 с, не давая жидкости закипеть. Смесь охладить и довести объем до метки спиртово-эфирной смесью (3:1). Содержимое колбы перемешать и отфильтровать. Фильтрат в количестве 10 мл отобрать пипеткой в фарфоровую чашку и выпарить досуха на водяной бане. Остаток в чашке растворить в 5 мл хлороформа. В дальнейшем для анализа использовать полученный экстракт неомыляемых липидов в хлороформе.
Коэффициент разведения (n) необходимо учитывать при определении холестерола по любому из вышеописанных методов:
,
где 25 – объем спиртово-эфирного экстракта, мл;
0,1 – навеска подсушенного с гипсом анализируемого материала, г;
10 – объем экстракта, используемого для приготовления экстракта неомыляемых липидов в хлороформе, мл.
Выделение холестерола из молочного жира
Ход анализа. Пробу сливочного масла 1 г расплавить при температуре не выше 50 оС и растворить в 10 мл пентана. Нерастворимый в пентане осадок отфильтровать через сухой бумажный фильтр, промыть трижды небольшими порциями пентана по 2 мл. Полученный экстракт на основе пентана собрать в колбу со шлифом и отогнать растворитель на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток растворить в точном объеме хлороформа. На анализ отобрать пипеткой точный объем хлороформного раствора, содержащего стерины.
Определение холестерола в шерстяном воске
Сложность определения холестерола в шерстяном воске связана с тем, что холестерин присутствует в виде эфиров и требуется стадия гидролиза. Кроме того, помимо холестерола в шерстяном воске присутствует ланостерин, который также дает положительную реакцию с реактивами Либермана – Бухарда и Златкиса – Зака. Мешающее влияние ланостерина может быть устранено за счет предварительного разделения с помощью дигитонина. После нейтрализации эфиров холестерола холестерол осаждают дигитонином, в то время как ланостерин при этом не осаждается.
Ход анализа. Экстракт шерстяного воска (хлороформ и метанол) поместить в круглодонную колбу со шлифом, добавить избыток 50%-го раствора гидроксида калия и подсоединить воздушный холодильник. Колбу с анализируемой пробой поместить в водяную баню с температурой 65 0С и выдержать при этой температуре 3 часа. Колбу охладить до комнатной температуры и нейтрализовать гидролизат 40%-ным раствором серной кислоты.
Неомыляемую фракцию экстрагировать диэтиловым эфиром. Дальнейший анализ вести по методу определения стеринов путем осаждения в виде дигитонидов.
|
Необходимые реактивы, посуда, оборудование: §50%-ный раствор гидроксида калия, 0,5 н раствор соляной кислоты, 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина; §колбы вместимостью 100 мл с воздушными холодильниками; мерные цилиндры, пипетки, бюретка, капельницы; §водяная баня, аналитические весы. |