Перспективным методом количественного определения водорастворимых витаминов является микробиологический. Перечень тест-культур для микробиологического определения витаминов группы В приведен в табл. 2.2.21.
Для определения различных форм фолатов в пищевых продуктах применяют метод, сочетающий в себе микробиологический анализ с хроматографической техникой разделения фолатов. Для микробиологического тестирования обычно используют в качестве тест-организмов Lactobacillus rhamnosus АТСС 7469, Streptococcus faecalis ATCC 8043 и Pedicoccus cerevisiae ATCC 8081. Первый вид микроорганизмов используют для количественного определения фолиевой кислоты, поскольку он растет почти на всех формах фолиевой кислоты. Два других вида обладают избирательной чувствительностью к различным формам фолиевой кислоты и пригодны для их раздельного определения.
Таблица 2.2.21. Перечень тест-культур для микробиологического определения витаминов группы В
|
Наименование витамина |
Наименование, используемой тест-культуры |
Чувствительность метода, нг |
|
Рибофлавин (В2) |
Laktobacillus casei |
5 |
|
Пантотеновая кислота (В3) |
Saccharomycodes |
1 |
|
Пиридоксин (пиридоксаль, пиридоксамин) В6 |
S. ludwgii KM |
5 |
|
Фолиевая кислота (В9) |
STR. faecalis ATCC 8043 |
0,1 |
|
Никотиновая кислота (никотинамид) В5 |
Zygosaccharomyces |
|
|
Кобаламин (В12) |
Escherichia cjli 113–3 |
|
|
Биотин (В7) |
Sacchromyces cerevisias 77 |
0,005 |
Сущность микробиологического метода сводится к следующему: фолиевую кислоту экстрагируют из анализируемой пробы, экстракт разбавляют и смешивают со специальной питательной средой для определения фолиевой кислоты. Вносят в микротитровальные планшеты, покрытые Lactobacillus rhamnosus (штамм АТСС № 7469). Рост бактерий происходит только в присутствии фолиевой кислоты в питательной среде и не прекращается пока все количество витамина не будет израсходовано. Этот метод является одним из самых точных и достоверных, определению фолиевой кислоты не мешает наличие примесей.